בתמונה מטה מוצגות תוצאות מבחן דוט בלוט שנעשה ע"י צביעה עם שני נוגדנים פלואורסנטיים.
אותה הממברנה נבחנה לעוצמת פלואורסנציה ירוקה (תמונה שמאל) ואז לעוצמת פלורסנציה אדומה (תמונה ימין).
להבהרה, כל Dot על פני הממברנה צולם פעמיים בשתי חשיפות עוקבות (לדוגמה A1 Dot נבצע חזר באדום וחלש בירוק).
מה ניתן לומר על תוצאות המבחן?
נוגדן במיהול ידוע עבר סדרה מיהולים פי 6 בצלחת ELISA (בדומה למעבדה 2). ערכי OD נקראו ונבנה עקום כיול (לוגריתמי), ממנו חולצה משוואת הקו הישר
Y=-0.34X+4.6.
נוגדן לא ידוע הוכנס לצלחת ה- ELISA (בטריפליקאט) ולאחר שלושה מיהולים (פי 2) נמצא ערך בטווח המתאים לקו המגמה של OD=0.35.
בדומה לדוח המעבדה חשבו מיהול תואם לנוגדן לא ידוע במבחנת המקור.
לבחינת פאגוציטוזה של חיידקי סלמונלה נלקחו דגימות דם מאנשים שונים.
ראשית הופרדו תאי הדם מהפלסמה. לאחר מכן חוממה כל פלסמה כך שכל מרכיבי המשלים נהרסו ואז עורבבה שוב עם התאים (התקבלו מבחנות עם תאים+פלסמה ללא משלים).
התאים והפלסמה מכל הדגימות הודגרו למשך שעה עם חיידקי הסלמונלה (בדומה למעבדה 1) וכביקורת הודגרו החיידקים במבחנה עם PBS.
לאחר ההדגרה עם החיידקים הושקעו התאים בצנטריפוגה והחיידקים נזרעו בצלחות אגר בשני מיהולים.
בספירת המושבות בצלחות התקבלו התוצאות הרשומות בטבלה המצורפת (המספרים מייצגים CFU).
בהנחה שמספר התאים הפאגוציטים זהה בכל הדוגמאות, מה ניתן לומר על תוצאות אלו?
טכנאי במעבדה לאימונולוגיה גידל למשך 48 שעות תאים מאקרופאגים במספר כלים בהם ניתנו להם תנאים שונים ולאחר מכן אסף את הנוזלים אליהן הופרשו חלבונים כדוגמת החלבון אינטרלאוקין 10 (IL-10). הטכנאי מעוניין לפתח את המבחן הרגיש ביותר שניתן על מנת לבחון את הפרשת ה- IL-10 מהתאים.
רשימת החומרים הקיימים במעבדה:
A. דוגמאות נוזלי תאים מאקרופאגים שנאספו בניסוי
B. נוגדן מונוקלונאלי Mouse anti Human IgG מצומד לאנזים
C. נוגדן Chicken anti Human IgM מצומד לאנזים
D. נוגדן מונוקלונאלי Mouse IgG anti IL-10
E. סובסטרט OPD
F. בופר חלב
G. נוגדן Mouse anti Goat
H. נוגדן Goat IgG anti IL-10
I. קורא פלטות ELISE plate reader
J. פלטות ELISA (96 באריות)
K. נוגדן Horse anti Goat IgG מצומד לאנזים
L. נוגדן Horse anti Mouse IgG מצומד לאנזים
בהתייחס לרשימה הנ"ל מהו סדר השימוש הנכון בחומרים (משמאל לימין לא כולל שטיפות) לבדיקת רמות IL-10 בדוגמאות נוזלי תאים?